Lumineszenz-Spektrometrie, Fluorimetrie
Fluorimetrie als Emissionsverfahren der Molekülspektroskopie: wie Moleküle nach Lichtabsorption selbst Licht aussenden, wie man diese Emission misst und wofür man sie in der Arzneimittelanalytik nutzt.
In der UV-Vis-Spektroskopie misst man, wie viel Licht eine Probe absorbiert. Die Fluorimetrie fragt, was das Molekül danach mit der aufgenommenen Energie macht. Ein Teil der angeregten Moleküle gibt sie als Licht wieder ab, und genau dieses emittierte Licht wird gemessen. Wer eine Chininlösung unter UV-Licht bläulich leuchten sieht, hat das Prinzip schon vor Augen.
Am Anfang stehen die angeregten Zustände und die Wege zurück in den Grundzustand, an denen sich Fluoreszenz und Phosphoreszenz unterscheiden. Darauf bauen die Größen auf, die die gemessene Intensität bestimmen, ebenso die Störungen durch Konzentration und Matrix und die Frage, welche Molekülstrukturen überhaupt fluoreszieren. Mit diesem Wissen wird der Aufbau des Fluorimeters verständlich, das sich in einem entscheidenden geometrischen Detail vom Photometer unterscheidet.
Die Anwendungen reichen von Gehaltsbestimmungen und Arzneibuchprüfungen bis zur gezielten Markierung von Analyten, die von sich aus nicht fluoreszieren. Gegenüber der Absorptionsmessung gewinnt man dabei vor allem Empfindlichkeit und Selektivität. Als Detektionsprinzip begegnet die Fluoreszenz später auch in der Chromatographie wieder.
Prinzip
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